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酒制及超微粉碎对当归散中黄芩甙溶出效果的影响

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酒制及超微粉碎对当归散中黄芩甙溶出效果的影响

发布日期:2017-05-08 作者: 点击:

山东中医杂志2001年4月第20卷第4期

酒制及超微粉碎对当归散中黄芩甙溶出效果的影响

王爱武1  耿军1魏巍2

(1、       山东省立医院,山东 济南250021;2、山东中医药大学,山东 济南250014)

[摘要]目的:比较酒制及超微粉碎对当归散中黄芩甙溶出量的影响。方法:高压液相色谱法。色谱柱为ODS-C18柱,流动相为甲醇-水冰醋酸(47:53:0.1),检测波长280nm,流速为0.8ml˙min-1,柱温为室温。结果:酒制对当归散中黄芩甙溶出几乎无影响,超微粉碎可增加黄甙的溶出。结论:对当归散中黄芩溶出量而言,酒制意义水大,超微粉碎有重要意义。

[关键词]酒制;当归散;黄芩甙

[中图类号]R282.710.2     [文献识码]B  [文章编号]0257-358X(2001)04-0237-02

当归散源于《金匮要略》,有当归、川芎、黄芩、白芍、白术组成,全方具养血健脾、清热安胎之功,为中医妇科常用方剂。原方系生饮片制散,用酒送服。经历代演变,方中除白术外,其余四药均衍化为酒制品。曾有酒制对复方中阿魏酸、芍药甙等成分溶出效果比较的报道[1],未见有对黄芩甙溶出量的研究。鉴于黄芩是方中清热安胎的主要药物,本文就酒制对黄芩甙的溶出量进行了比较,旨在全面衡量酒制的意义。另据报道,超微粉碎技术在完善中药炮制技术、改善中药固体制剂的品质方面具有独特的优势和广阔的应用前景[2],本文引入这一技术,研究其对当归散中黄芩甙溶出的影响,从另一方面探讨当归散炮制及制剂的意义。

1仪器与材料

仪器:Water 2690型高效液相色谱仪及996型二极管阵列检测器,BFM-6型混炼机,SB 2200型超声波发生器(上海必能信超声有限公司生产),电子分析天平MET-TIER 240(瑞士生产)。

试药与试剂:生当归散及酒制当归散由本院中药制剂室提供。超细生当归散由山东省医药工业研究所采用超微粉碎技术制成。黄芩甙对照品由中国药品生物制品鉴定所提供。所用试剂,甲醇为色谱纯,水为生重蒸馏水,冰醋酸及乙醇为分析纯。

2实验方法

2.1色谱条件 ODS-C18柱(4.6mm×150mm,5µm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(47:53:0.1)检测波长为280nm,流速为0.8ml˙min-1,柱温为室温。

2.2黄芩甙标准曲线的制备  精密称取黄芩甙对照品适量,用甲醇溶解并稀释成浓度为40µg˙ml-1的溶液,精密吸取对照品溶液0.63,1.25,2. 00,2.50,3.75,5.00 ml,加甲醇稀释至5 ml,摇匀,分别吸取上述各液10µl,注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积Y对进样浓度X作线性回归,得回归方程为Y=30199.45X+5601.98,γ=0.9998,黄芩甙对照品在进样量0.05~0.40µg范围内成良好的线性关系。

2.3样品溶液的制备与测定   取每种样品1g,精密称定,加50%甲醇50ml,超声提取20min,过滤。取滤液1ml,加50%甲醇稀释定容至10ml,用0.45的微孔滤膜过滤,吸取2ml至自动进样阀中进样,按上述色谱条件,记录黄芩甙的峰面积,按外标法计算含量。

2.4实验方法的精密度、重现性与稳定性   取同一对照品溶液,平行测定5次,记录峰面积,RSD为1.72%,说明精密度好。取同一批样品5份,照样品测定法测定,RSD为1.56%,说明重现性好。取同一份样品液分别在0,2,4,6,8hr进样测定,峰面积基本不变,RSD为1.6%。

3实验结果

取同一种样品5份,照样品测定法项目操作,结果见表1。

表1样品中黄芩甙含量

m/µg˙mg-1

黄芩甙含量(χ)                平均值

酒制当归散       25.993    26.401    26.578    27.054    26.695    26.544

生当归散         26.426    26.941    27.436    27.182    26.702    26.937

超细生当归散     31.472    31.530    32.093    32.125    31.350    31.714

 

从表1可看出,当归散经酒制后,黄芩甙的溶出略有降低,经超细处理后,黄芩甙的溶出明显增加。

4、讨论

当归散原方为生药散,即用酒冲服,后世将当归、川芎、白芍、黄芩酒制后配方入药,用水冲服,有研究认为,四药酒制除对总煎出物略呈助溶作用外,其余5种成分(还原糖、蛋白质、挥发油、阿魏酸、芍药甙)的溶出均低于生品配方[1]。本研究结果进一步提示,当归散用现行酒制品配方,没有显示对复方成分在体内的溶出是一个复杂的过程,体外试验与体内溶出有一定差距。中药经酒制后,其溶液的颜色及味道确实发生了变化,对于酒制品的取舍问题,还有待药理及临床验证。

实验结果表明,当归散经超微粉碎后,黄芩甙的溶出量明显增加,这与文献报道的“细胞经破壁后,细胞内的有效成分充分暴露出来,药物的释放速度及释放量会大幅度提高”[3]是致的。当归散中含有多种有效成分,其他诸如芍药甙、阿魏酸等是否与黄芩甙呈现相关变化,有待进一步研究。当然,对当归散进行超微粉碎的最终目的是为提高生物利用度和疗效,这一点有待药效学实验来证明。

[参考文献]

[1]吕文海,董祺.有同用酒方法对当归散成分溶出效果的比较[J].山东中医药大学学报,1997,21(1):69.

[2]王爱武,吕文海,耿晖.超微粉碎在中药生产应用概括及展望[J].时珍国医国药,2000,11(7):669.

[3]何煜,郭琪、杜晓敏.中药细胞级微粉碎对体内吸收的影响[J].中成药,1999,21(11):601.

 

中国中药杂志

2001年第26卷第4期

炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究

吕文海1,邱福军2,王作明3

(1、山东中医药大学,山东 济南 350014;2.中国药材公司,北京 100062;3、山东省委医院,山东 济南250001)

[摘要] 目的:比较水蛭煎剂、普通散剂的药效以及新法炮制与超微粉碎对其药效的影响。方法:用BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定了生、制水蛭超微散的粒度。通过小鼠抗凝血、抗血栓作用,比较了水蛭丝水煎剂1/2煎剂剂量的普通散、超微散、制水蛭超微散的药效。并对其安全性进行了考察。结果:供试品药效由强到弱为制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎剂、对照组。结论:水蛭经超微粉碎,尤其是新法炮制后超微粉碎,可明显改善气味、口感,提高药效。

[关键词] 水蛭;新法炮制;超微粉碎;增效

[中图分类号]  R283.1   [文献标识码]B[文章编号] 1001-5302(2001)04-0241-04

水蛭作为经典的破血逐瘀药,近代在中医临床与中成药生产中得到了愈来愈广泛的应用,并成为了一种世界性药物。经前期工作,初步证明水蛭的主流药用品种为蚂蟥(宽体金线蛭Whit mania pigra Whit man);切丝入药优于《药典》规定的切段入药;生用在活血化瘀等药效方面,优于传统烫制品;按新法制成的制水蛭能在改善原药气味的同时,较好的保存其内在成分,且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循环、降胆固醇等药效学指标,均优于传统烫制水蛭,部分指标也优于生水蛭,有保质增效的趋势[1]。但水蛭在临床应用中入汤剂味劣难服,易反胃败胃。临床中亦有研末或装胶囊吞服效优的经验。

近几年由于超微粉碎技术的发展,可达到使动、植物细胞90%以上破壁的细度。由于粒度的减小,也有利于改善药物的气味及服用口感。鉴于水蛭经炮制和超微粉碎后有无药效与应用方面的优势,未见报道,笔者对此作了初步的实验研究。

1实验材料

1.1供试材料

水蛭购自山东省立医院,经李定格、李峰老师鉴定为蚂蟥(宽体金线蛭Whit mania pigra Whitman)。

1.2供试品制备

水蛭丝:原药材挑去杂质,擦净,盖湿纱布略润后切2~3mm细丝。在切制过程中发现,部分药材中间填充有白色结晶性粉末,口尝无咸、涩味、初步印象为石膏,切丝晾干后过筛可大部脱落。经紫外灯照射45min后密闭备用。

生水蛭水煎液:净水蛭丝2.6g,加10倍量水浸泡30min,微沸30min,过滤,药渣加8倍量水,微沸30min,过滤,合并滤液,定容100ml,浓度为26˙ml-1。

生水蛭普通散:净水蛭丝经粉碎研磨过100目筛。

生水蛭超微散:净水蛭丝经BFM-6型倍力微粉机粉碎。出料温度35~40℃。

制水蛭超微散:净水蛭丝酒润麸制炮制后,BFM-6型倍力微粉机粉碎。出料温度同上。

3种散剂均平铺一薄层,经紫外灯照射45min后,密切保存备用。

1.3  实验动物与仪器

昆明种小鼠(山东中医药大学动物房提供):BFM-6型倍力微粉机;BT-1500型离心沉降式粒度分布仪。

2 实验方法与结果

1.1水蛭超微散粒度的测定

按《药典》规定,水蛭普通散的粒度为(150±6)µm。生、制水蛭超微散的粒度经BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定,结果见表1、表面化。实验表明,生、制水蛭经BFM-6型倍力微粉机粉碎,可使其中位径分别达到10.24µm和7.79µm;最大粒径分别为72µm和24.81µm;50%的粒度在10µm和8µm以下,90%的粒度在50µm和23µm以下,确能达到超微的效果,而且经新法炮制后更利于粉碎,其粒度明显小于生水蛭。

表1生水蛭超微粉粒度分布测试结果

粒径        区间频率       累积频率

/µm           /%               /%

0.00~1.00       3.33            3.30

1.00~2.00       4.70            8.80

2.00~3.00       4.93            12.93

3.00~4.00       5.38            18.32

4.00~5.00       5.27            23.59

5.00~6.00       4.71            28.30

6.00~7.00       5.40            33.70

7.00~8.00       5.79            39.49

8.00~9.00       5.50            44.99

9.00~10.00       4.23            49.22

10.00~11.00       3.86            53.08

11.00~12.00       0.72            53.80

12.00~13.00       0.00           53.80

13.00~14.00       0.78            54.58

14.00~15.00       3.15            57.73

15.00~20.00       10.59            68.31

20.00~30.00       20.19            88.50

30.00~40.00       1.13            89.63

40.00~50.00       1.02            90.65

50.00~60.00       6.19            96.84

60.00~70.00       3.05            99.89

70.00~72.00       0.11            100.00

72.00~73.00       0.00            100.00

73.00~74.00       0.00            100.00

注:中位径10.24µm   最大粒径72µm

 

2.2   供试品对小鼠凝血时间的影响取体重(28±3)g的成年雄性小鼠,随机分为5组。水蛭煎剂组以0.4mg˙g-1剂量灌胃。3种散剂组每天灌胃临时配成13mg˙ml-1的混悬液,以0.2mg˙g-1的剂量灌胃(煎剂的1/2量)。用生理盐水作对照。每天3次,连续给药3d ,第4天给药1h后,从小鼠眼内毗球后静脉丛取血,按毛细管法[2],测定各组小鼠的凝血时间,经t检验统计分析,结果见表3。实验表明,水蛭煎剂与水蛭散剂均有确切的抗凝活性。1/2剂量的散剂,其抗凝效果优于汤剂。超微散的抗凝活性有优于普通散的趋势,制水蛭超微散又明显优于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增强其抗凝活性。

表2  制水蛭超策粉粒度分布测试结果

粒径        区间频率       累积频率

/µm           /%               /%

0.00~1.00       2.59            2.59

1.00~2.00       4.19            6.77

2.00~3.00       6.51           13.28

3.00~4.00       5.22            18.50

4.00~5.00       12.06            30.56

5.00~6.00       6.20            36.75

6.00~7.00       7.03            43.79

7.00~8.00       6.26            50.05

8.00~9.00       6.85            56.89

9.00~10.00       2.84            59.73

10.00~11.00       3.51            63.24

11.00~12.00       0.64            63.88

12.00~13.00       0.00           63.88

13.00~14.00       0.72            64.60

14.00~15.00       2.77            67.37

15.00~20.00       4.09            71.46

20.00~30.00       4.75            76.21

30.00~40.00       1.99            78.20

40.00~50.00       3.38            81.58

50.00~60.00       2.16            83.74

60.00~70.00       1.92            85.66

70.00~72.00       4.61            90.27

72.00~73.00       6.17            96.43

73.00~74.00       3.57            100.00

注:中位径7.97µm   最大粒径24.81µm

 

表3  供销试品对小鼠凝血时间的影响

组别             n         剂量       凝血时间         p

                         /mg˙g-1        /min

生理盐水         10        0.4        2.96±1.43

生水蛭水煎剂     13        0.4        4.95±2.32       <0.05()

生水蛭普通剂     14        0.2        6.23±2.73       >0.05()

生水蛭超微散     13        0.2        6.33±2.60       >0.05()

制水蛭超微散     13        0.2        9.38±2.19       <0.01()

注:()示该组与上一组比较

2.3  供试品对小鼠出血时间的影响

取体重(28±3)g的成年雄性小鼠,随机分为5组。以上法相同剂量给小鼠灌胃3d,每天2次,第4天给药1h,用剪尾法[2]测定各组小鼠剪尾5mm的出血时间,结果见表4。实验表明,生水蛭水煎液与对照组相比,虽有作用增强的趋势但无显著性差异,而普通散剂组呈显著性差异,两种超微散均为极显著性差异,制超微散更优。

表4  供试品对小鼠出血时间的影响

组别             n         剂量       凝血时间         p

                         /mg˙g-1        /min

生理盐水         10        0.4        7.95±2.58

生水蛭水煎剂     10        0.4        10.28±3.19       >0.05()

生水蛭普通散     12        0.2        14.32±7.08       <0.05()

生水蛭超微散     12        0.2        15.42±5.09       <0.01()

制水蛭超微散     10        0.2        16.45±4.55       <0.01()

注:()示与NS组比较

2.4 供试品对小鼠体内抗栓作用的影响

抗栓实验方法学研究认为,在(37±1)℃的生理盐水中,测定小鼠尾出血时间,与鼠颈动脉旁路血栓形成法具有很好的平行性。可作为一种简便易行的抗血栓形成药物的体内初筛法用于实验[3]。取体重(20±2)g的雄性小鼠随机分为5组,以给定剂量灌胃3d,第4天给药1h后,将小鼠固定,距尾尖3mm处剪断,垂直放放(37±1)℃生理盐水中,使尾端在液面下3cm,记录出血时间,结果见表5。实验表明,体内抗栓作用,也以超微散为优,但生、制品之间的差异不明显。

表5供试品对小鼠体内抗栓作用比较

组别             n         剂量       凝血时间         p

                         /mg˙g-1        /min

生理盐水         10        0.3ml        0.95±0.22

生水蛭水煎剂     10        0.390        1.09±0.25       >0.05()

生水蛭普通散     12        0.195        1.24±0.59       >0.05()

生水蛭超微散     10        0.195        1.66±0.76       <0.05()

制水蛭超微散     10        0.195        1.69±0.53       <0.01()

注:()示与NS组比较

2.4对小鼠安全性的考察

水蛭经炮制和超微粉碎后药效有所增强,其毒性是否增大?为此考察了供试品对小鼠的安全性。取体重(20±2)g的健康小鼠80只,随机分为4组,1组给予1300/mg˙ml-1的水煎液,0.4ml/只,3次/d,1.56g˙d-1(相当于《药典》规定的成人每日汤剂服用量的200倍)。其余3组分别给予130/mg˙ml-1的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散0.3ml/只,3次/d,117mg˙d-1(此为能通过灌胃器的散剂最大剂量,相当于《药典》规定成人每日服粉末量的30倍),给药后观察1周,结果小鼠活动、粪便、毛色正常,无死亡。每组平均体重增加6~8g,说明水蛭经新法炮制和超微粉碎后用药是安全的。该结果与前期工作和水蛭的亚急性毒性报道[4]相一致,支持临床中认为“水蛭系疗效卓著的无毒品”的观点。

3 小结与讨论

3.1水蛭丝入药,既有利于其药物成分的煎 出,又有利于祛除水蛭体内人为掺入杂质,优于《药典》规定的切段入药。

3.2 生水蛭经超微粉碎,90%的粒度为普通散的1/4,50%的粒度为普通散的1/15,且颜色变浅,腥味降低,质地细腻,利于吞服。1/2煎剂剂量的抗凝血、抗血栓作用优于水蛭丝煎剂,肯定更优于《中国药典》2000年版规定的水蛭段煎剂,证明多数临床经验认为水蛭服散效优是正确的,利用超微技术将更有利于水蛭药效的发挥。

1.3水蛭经新法炮制后,有利于矫正其气味,超微粉碎后其粒度也小于生水蛭,最大粒径为生水蛭超微粉1/3,仅为24µm。实验药效指标在3种散剂中呈最优趋势,值得进一步深入研究及推广应用。

1.4虽然药物粒度的减小,有利于其溶解吸收并改善气味口感,但也会引起表面能和稳定性等方面的变化。制水蛭超微粉的稳定性及最佳粒度范围等问题,还有待于进一步研究。

1.5水蛭作为一种世界性药物,研究最多的品种是日本医蛭(Hirude nipponica  Whitman),而我国临床用药的主流商品是宽体金线蛭。该品种有效部位及有效成分的研究,目前几近空白。深入研究其成分,将有利于饮片质量的控制和炮制原理的研究,此类探索目前正在进行之中。

[参考文献]

[1]吕文每,王琦,武继彪,等.水蛭饮片炮制研究.中药材,1996.19(4):294

[2]李仪奎.中药药理实验方法学.上海:上海科学技术出版社,1991.494.

[3]顾云,孟娟如.介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法.中国药理学通报,1991,7(4):317

[4]陈小野,邹世洁.水蛭的医学研究概述.成都中医学院学报.1987,10 (5):51.

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